ｐ１４ＡＲＦ基因在肺癌中的表达及意义

【摘要】:目的:探讨p14^ARF基因在肺癌中的表达及意义｡方法:采用免疫组化S-P法,检测60例肺癌及20例正常肺组织中p14^ARF蛋白的表达情况｡结果:p14^ARF在肺癌组织中的阳性率为43.3%,显著低于正常肺组织的95%,两组间差异有显著性(P<0.05);p14^ARF与肺癌患者的性别､年龄､组织学类型､分化程度及淋巴结转移等无相关性(P>0.05)｡结论:p14^ARF的表达缺失在肺癌的发生发展中起重要作用,可作为肺癌基因诊断和治疗的靶点｡

【关键词】:肺癌　p14^ARF基因

【中图分类号】R734.2;Q753 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8517(2008)07-0004-03

肺癌是人类癌症致死的主要原因之一,半个世纪以来肺癌的发生率和死亡率一直呈明显上升趋势,在我国多数大城市肺癌的发病率和死亡率居恶性肿瘤的第一位或第二位｡肺癌的发生､发展是内因和外因相互作用,多基因多阶段变异积累的结果｡随着分子生物学的发展,基因及其产物的表达与肿瘤的关系已成为肺癌防治的研究热点｡p14^ARF是近年来引起重视的一个专职调控细胞周期的抑癌基因, 其可通过p53依赖通路和p53非依赖通路监控细胞周期[1-2], 从而抑制肿瘤发生｡本研究采用免疫组化检测肺癌组织及正常肺组织中p14^ARF蛋白的表达情况,探讨其在肺癌及正常肺组织中表达的差异及临床意义｡

1 材料与方法

1.1 组织标本:

组织标本选自昆明医学院病理教研室的存档蜡块共80例,其中正常人体肺组织20例,肺癌组织60例(鳞癌28例,腺癌22例,腺鳞癌5例,大细胞癌5例),男性43例,女性17例,年龄最小29岁,最大63岁｡所有标本均经10%的中性福尔马林固定,常规石蜡包埋,5μm连续切片｡

1.2 免疫组化方法:

采用S-P法,实验严格按照试剂盒说明书进行｡p14^ARF为(1∶150,柠檬酸高温抗原修复)兔抗人多克隆抗体,美国Thermo生物有限公司产品,DAB显色,苏木素复染｡以已知阳性片为阳性对照,用PBS代替一抗作阴性对照｡

1.3 结果判定:

p14^ARF蛋白定位于细胞核,为黄色或棕黄色颗粒｡采用半定量积分法,具体如下:每例标本随机计数10个高倍视野,计数每个高倍视野中阳性细胞数所占的百分比并记分:①阳性细胞数≤5%为0分,6%~25%为1分,26%~50%为2分,51%~75%为3分,>75%为4分;②阳性反应强度:无色为0分,淡黄色为1分,黄色为2分,棕黄色为3分｡将①②两者积分相乘,0分为阴性(-),1~4分为弱阳性(+),5~8分为阳性(++),9~12分为强阳性(+++)｡

1.4 统计学方法:应用SPSS13.0统计软件对实验数据进行分析处理,数据中的计数资料用r×c卡方检验｡

2结果p14^ARF在肺癌中的阳性率为43.3%,正常肺组织为95%,两组间差异有显著性,P<0.05(表1);p14^ARF与肺癌患者的性别､年龄､组织学类型､分化程度及淋巴结转移等临床病理特征无相关性,P>0.05(表2)｡

3 讨论

p14^ARF是Quelle[3]等在研究CDKN2A位点时发现的不同阅读框架(alternative reading frame,ARF) 基因, 位于INK4a-ARF基因位点｡p14^ARF可被c-myc､Ras和E2F-1等癌基因诱导高表达,然后和MDM2结合, 将MDM2屏蔽于细胞核内,使MDM2介导的p53泛素化酶降解,最终延长了p53蛋白的半衰期并抑制了MDM2介导的p53转录的下调,使p53蛋白合成增加,引起细胞周期阻滞于G1-S期和G2-M期及细胞凋亡[1]｡研究显示除了通过以上p53依赖通路以外p14^ARF还可经p53非依赖通路监控细胞周期,p14^ARF可以通过其氨基末端的E2F结合位点和转录因子E2F结合,下调Rb/E2F通路中终末靶点E2F因子的转录活性,使E2F-1的表达减少抑制其对细胞周期的正性调节作用,阻滞细胞周期于G1-S期并诱导细胞凋亡,防止肿瘤发生[2]｡

Kamijo等最初在小鼠身上对pl4ARF进行研究,发现pl4ARF缺乏的小鼠有较高的肿瘤生成倾向,能生成肉瘤､淋巴瘤和癌等恶性肿瘤,并且生存期缩短,认为该基因是一个重要的肿瘤监视靶点[4-5]｡

研究发现p14ARF在大多数原发肿瘤中失活缺失,其失活的机制有突变､纯合子缺失､杂合子缺失和启动子5’CpG岛异常甲基化等; 并且研究证实p14ARF在肺癌､乳腺癌､肠道肿瘤等中均有异常表达[6]起抑癌基因的作用｡

Mori等[7]发现p14ARF 的失活可使p53-MDM2-ARF肿瘤抑制途径失调,引起非小细胞肺癌｡Nicholson等[6]经研究发现在53个肿瘤细胞系中有12个(23%)出现了p14ARF的缺失,其中11个非小细胞肺癌细胞系中有7个出现缺失,还发现p14ARF的丢失在非小细胞肺癌中较小细胞肺癌显著,认为在肺癌的发生中p14ARF起抑癌基因的作用｡Park等[8]在一组非小细胞肺癌细胞系中则发现p14ARF的失活是由突变引起的｡本实验显示p14ARF在肺癌中的阳性表达率较正常肺组织明显降低,且差异有显著性(P<0.05),提示p14ARF失活不能正常表达时, 使细胞增殖失控而形成肿瘤,在肺癌的发生发展中起重要作用｡本研究还显示p14ARF蛋白表达与肺癌患者的性别､年龄､组织学类型､分化程度及有无淋巴结转移等临床病理特征无相关性(P>0.05),这与文献报道相似[9]｡

根据p14ARF在肺癌中的表达特点,有实验验表明在肺癌细胞系中导入外源性的p14ARF可以抑制细胞周期诱导细胞凋亡,提高肿瘤细胞对放疗的敏感性[10]｡Xie等[11]发现在INK4a-ARF基因位点缺失的肺癌细胞系A549中转染p14ARF后,可以抑制肿瘤生长和提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性｡这些结果表明,p14ARF将可能成为肺癌基因治疗的靶点｡

参考文献

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