Cripto—1介导的上皮间质转化在卵巢浆液性腺癌形成中的作用

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1 材料与方法

1. 1 标本来源 选取2010～2015年厦门大学附属第一医院病理确诊卵巢浆液性腺癌患者60例。年龄24～73岁， 中位年龄58岁， 平均年龄56.3岁。术前未经辅助治疗。选取同期病理确诊的卵巢浆液性腺瘤患者20例及交界性浆液性肿瘤患者30例作为对照。所有标本均经10%福尔马林固定， 常规脱水、石蜡包埋， 将蜡块制备3 μm厚度连续切片。

1. 2 结果判定 采用免疫组化SP法， 按试剂盒说明书操作， Cripto-1主要定位于细胞质， 出现棕黄色颗粒状染色为阳性；E-cadherin蛋白主要定位于细胞膜， 细胞膜呈棕黄色颗粒为阳性；Vimentin蛋白定位于胞浆， 胞质中呈棕黄色颗粒为阳性表达。

1. 3 统计学方法 采用SPSS17.0统计学软件处理数据。计数资料以率（%）表示， 采用χ2验；相关性采用Spearman相关分析。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

Cripto-1在卵巢浆液性腺瘤中的表达低于浆液性腺癌和交界性浆液性肿瘤， 差异具有统计学意义（P<0.05）， E-cadherin在卵巢浆液性腺瘤中的表达高于浆液性腺癌和交界性浆液性肿瘤， 差异具有统计学意义（P<0.05）。见表1。Cripto-1、Vimentin在卵巢浆液性腺癌中的表达与组织学分级、淋巴结转移有关（P<0.05）；E-cadherin的表达与组织学分级有关（P<0.05）， 与淋巴结转移无关（P>0.05）。见表2。在卵巢浆液性腺癌中Cripto-1与E-cadherin的表达呈负相关（r=-0.81， P<0.05）， Cripto-1与Vimentin的表达呈正相关（r=0.42， P<0.05）。见表3。Cripto-1分别在卵巢浆液性腺瘤、浆液性交界性肿瘤、浆液性腺癌中的免疫组化染色见图1， 图2， 图3。

3 讨论

肿瘤细胞发生侵袭转移是卵巢癌死亡的主要原因， 其机制尚未十分明确， 一直以来是研究者关注的热点。肿瘤细胞由良性向恶性转变时， 为适应与周围基质的接触， 其形态学和分子机制也随之发生了变化， 上皮细胞经去分化转变为间叶细胞， 同时细胞的粘附力降低， 运动迁移能力增强， 即EMT， 既往有研究报道， EMT与获得干细胞样特性有关[3]。Luo等[4]发现， 卵巢癌EMT的发生与干细胞的形成密切相关， 而干细胞对传统治疗手段不敏感[5， 6]。积极的探索卵巢浆液性腺癌的发病机制， 从初始阶段抑制肿瘤细胞的发生发展， 对卵巢癌患者的防治尤为重要。

E-cadherin是跨膜糖蛋白， 主要位于上皮细胞， 能抑制基质金属蛋白酶的产生， 通过介导上皮细胞间的粘附， 促进同型细胞间连接的紧密性， 维持细胞形态、运动及粘附能力。发生EMT时， 正常上皮细胞表面的E-cadherin表达下调， 而代表间质细胞表达的标记蛋白表达升高， 导致癌细胞之间粘附能力下降， 加快细胞的侵袭转移[7， 8]。本研究中， 在浆液性腺瘤中E-cadherin的表达程度较高， 其表达程度与浆液性腺癌患者的组织学分级有关（P<0.05）， 肿瘤从良性向交界性再向恶性转变过程中， 其表达程度越来越低， 并且表达程度与浆液性腺癌患者的分化有关， 在高-中分化组织中的表达高于低分化， 说明从良性到癌这个转变过程中其细胞间的粘附能力越来越差。Vimentin是间质表达的标记物， 但在一些低分化恶性肿瘤的上皮组织中也有表达。本研究中Vimentin的表达水平与卵巢浆液性腺癌患者的组织学分级和淋巴结转移有关（P<0.05）， 分化越差的组织中其表达程度越高， 说明在一些肿瘤发生过程中， 其细胞形态和生长方式也发生变化， 上皮细胞向纤维细胞样形态转变， 更易移动， 进而引起EMT的发生。

Cripto-1基因为表皮生长因子家族的成员。在人几种不同类型的肿瘤中过表达， 但其生物学行为在恶性肿瘤中的机制不明。本研究发现， 浆液性腺瘤患者Cripto-1的表达水平较低， 其表达程度与浆液性腺癌患者的组织学分级和淋巴结转移有关（P<0.05）。提示其阳性的正常组织细胞存在有恶变的潜在风险， 高表达可能促进肿瘤生长。进一步行Spearman相关分析结果显示， 在癌组织中Cripto-1的表达程度较高， 而E-cadherin的表达程度较低， 二者之间呈负相关（r=-0.81， P<0.05）， 而与Vimentin的表达程度呈正相关（r=0.42， P<0.05）， 由此可见， 随着病变恶性程度的增高， Cripto-1的阳性表达增高， E-cadherin表达下调， Vimentin表达于上皮中。本次研究发现， 当Cripto-1表达较高时， E-cadherin的表达受到抑制， 而其表达程度降低说明细胞间粘附能力下调， 进而促进上皮间质转化的发生， 肿瘤细胞即播散种植于腹盆腔， 发生侵袭转移。其机制可能是， Cripto-1 通过激活Ras-Raf-MEK- ERK和PI3K-Akt信号通路刺激肿瘤细胞的增殖与存活。但EMT的发生是多因子共同作用的结果， 是肿瘤发生发展过程中的重要枢纽， 对其发生的分子机制还有待进一步研究， 早期阻断EMT的转变可以提高患者的远期生存率， 并且为治疗提供宝贵的机会。

综上所述， 在卵巢浆液性腺癌中Cripto-1、Vimentin表达上调， E-cadherin表达下调， 提示Cripto-1介导的EMT可能在卵巢浆液性腺癌侵袭转移过程中起作用。

参考文献

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[收稿日期：2016-03-25]