谷胱甘肽—S—转移酶—π在贲门癌中的表达及临床意义

【摘 要】目的：探讨谷胱甘肽-S-转移酶-π（glutathione S-transferase-π，GST-π）蛋白在贲门癌中的表达及临床意义。方法：采用免疫组织化学染色法检测196例胃贲门癌组织及癌旁组织中GST-π表达情况，结合胃癌患者临床资料分析GST-π表达与胃贲门癌临床病理参数之间的关系。结果：GST-π在胃贲门癌组织中的阳性表达率分别为38.27%（75/196）， GST-π蛋白在贲门癌組织中的表达在年龄、性别、淋巴结有无转移、不同肿瘤大小及浸润深度组间差异无统计学意义（P>0.05）； GST-π蛋白在贲门癌中的表达在不同肿瘤分化组间的差异有统计学意义（P<0.05）。结论：GST-π蛋白在贲门癌中的表达在分化较高的肠型胃癌中表达增加，可能参与该类型胃癌的化疗耐药性，GST-π蛋白在贲门癌中的高表达对临床肿瘤化学药物治疗有一定的参考意义。

【关键词】谷胱甘肽-S-转移酶-π；贲门癌；免疫组织化学技术；临床病理特征

中图分类号： R739.63 文献标识码： A 文章编号： 2095-2457（2018）32-0079-003

DOI：10.19694/j.cnki.issn2095-2457.2018.32.036

【Abstract】Objective： To investigate the expression and clinical significance of glutathione S-transferase-π proteins（GST-π） in cardiac carcinoma. Methods： Immunohistochemical staining was used to detect the expression of GST-π in 196 cases of gastric cardia carcinoma and adjacent tissues. And combined with the clinical data of patients with gastric cancer， the relationship between GST-π expression and the clinicopathological parameters of gastric cardia cancer was analyzed. Results： The positive expression rate of gst-aggression in gastric cardia cancer tissues was 38.27% （75/196）. The expression of GST-π in cardiac carcinoma was independent of the patient"s age， gender ， lymph node metastasis， tumor size and infiltration depth （P>0.05）. The expression of GST-π protein in cardiac carcinoma was statistically significant between different tumor differentiation groups （P<0.05）. Conclusion： The expression of GST-π protein in cardiac cancer is increased in the highly differentiated intestinal gastric cancer， which may be involved in the chemotherapy resistance of this type of gastric cancer. The high expression of gst-helper protein in cardiac cancer is of certain reference significance for clinical tumor chemical drug treatment.

【Key words】GST-π； Cardiac carcinoma； Clinicopathologic features

贲门癌（cardiac carcinoma）是指食管胃交界线下约2cm范围内的腺癌，又被称为食管-胃交界腺癌（Esophagogastric junction adenocarcinoma，EJA），中国贲门癌的死亡率和发病率在各类恶性肿瘤中位居前列。早期胃癌缺乏典型的临床症状，大多数患者发现的时候已是中晚期，这是胃癌死亡率很高一个重要的因素[1]。谷胱甘肽-S-转移酶-π （glutathione S-transferase-π，GST-π） 是GST家族的一员，GST家族广泛存在于许多原核及真核生物的胞质、线粒体、微粒体中[2]。哺乳动物体内的GST主要包括GST-α、GST-μ、GST-π、GST-ε及GST-θ五类，其中GST-π在多种组织中被发现，研究发现一些GST家族的某些亚型的分布具有一定的特异性，比如GST-π主要分布于呼吸道、消化道以及泌尿道[3-5]。已有研究发现GST-π作为自身保护酶，能减少氧化应激，清除氧自由基，稳定遗传物质，其在生物体内的作用是胃癌发生的保护因子。本研究主要通过免疫组织化学染色方法检测GST-π蛋白在贲门癌组织中的表达，探讨GST-π蛋白的表达情况与胃贲门癌发生发展的关系。

1 资料和方法

1.1 临床病理资料

收集滨州医学院附属医院2012年01月-2018年10月住院患者中贲门癌患者的病例196例，所有标本均未接受术前的放化疗等治疗手段，所有病例资料均完整且具有完整的病理资料。其中男性179例，女性17例，年龄>60岁127例，年龄≤60岁69例。肿瘤高分化104例，低分化92例，存在淋巴结转移的有138例，无淋巴结转移的有58例。肿瘤直径≥5.5cm的有98例，直径<5.5cm的有98例，肿瘤浸润外膜177例，为侵及外膜19例。

1.2 主要试剂与仪器

鼠抗人单克隆GST-π抗体购自北京中杉金桥生物科技有限公司，第二抗体购自生物晶美工程有限公司，DAB显色试剂盒为北京中杉公司产品，免疫组织化学Max VisionTM试剂盒购自福州迈新生物科技有限公司。实验过程皆按照相应试剂盒中使用说明书进行操作。

1.3 免疫组织化学染色

采用免疫组织化学Max VisionTM法，常规切片脱蜡水化，高温高压抗原修复后，其他具体操作步骤按试剂盒说明书进行，DAB显色及苏木精复染，脱水后中性树胶封片。

1.4 结果判定

GST-π蛋白阳性判定：细胞内胞浆呈现棕黄色、棕褐色细微颗粒。GST-π蛋白阳性程度判断：显微镜下随机视野中选择5个高倍视野，每个高倍视野随机选择100个细胞作为统计对象，计算出阳性细胞百分数，取其平均值。细胞内胞浆无棕黄色颗粒或阳性细胞百分数<25%为阴性病例；若25%≤ 阳性细胞百分数<50%，则界定该标本为（+）表达；若50%≤阳性细胞百分数<75%，则界定该标本为阳性（++）表达；若阳性细胞百分数≥75%，則界定该标本为强阳性（+++）表达，标记（++）、 （+++）为阳性。

1.5 统计学处理

应用SPSS21.0统计软件进行统计学分析，不同组间病理指标资料采用卡方检验，P<0.05认为组间具有统计学差异。

2 结果

（1）GST-π蛋白在胃癌组织中的表达免疫组化结果显示196例胃癌组织中75例GST-π蛋白表达阳性，阳性表达率39.47%。GST-π蛋白在贲门癌中的表达：GST-π蛋白在贲门癌组织中的表达与患者的年龄、性别和淋巴结的转移、肿瘤浸润深度及肿瘤大小无关（P>0.05）；GST-π蛋白在贲门癌中的表达与肿瘤的组织学类型相关（P<0.05）。（见表1）

3 讨论

胃癌的发生是一个多种基因参与、经历多个阶段的一系列复杂的程序，众多原癌基因的激活和/或抑癌基因的失活参与其中。贲门这一特殊部位的腺癌在临床中的发病率很高，多数患者在就诊时多伴有浸润、转移等临床特征。贲门癌的治疗相对较为复杂，手术治疗的同时还需要具有全身治疗作用的化学治疗方法[6]。安海莲等[7]通过实验表明在胃癌中其耐药性与年龄及性别无关，但与癌细胞的分化程度有关，即在高分化腺癌中耐药性明显高于低分化腺癌，有统计学差异，在癌细胞未侵及浆膜和有淋巴结转移的胃癌中其耐药率高于侵及浆膜及无淋巴结转移的胃癌，但无统计学意义。有研究表明GST-π的表达与胃癌耐药性相关，而我们通过实验证明了GST-π的表达与贲门癌的分化程度具有相关性，高分化的贲门癌中GST-π呈现高表达状态，低分化者低表达。

GST-π是体内与解毒有关的酶类，参与烷化剂、脂过氧化物、DNA过氧化物以及细胞毒物质产生自由基的解毒过程，许多抗肿瘤药物如烷化剂、蒽环类或重金属药物等可诱导癌细胞 GST-π的表达增加，使这些进入细胞内的有毒物质迅速与谷胱甘肽结合，形成无毒物质从而降解这些物质的毒性。编码GST-π的基因 GSTP1定位于染色体11q13，含有7个外显子和6个内含子，外显子5、6 存在基因多态性，可引起其表达的相应酶的活性不同，导致解毒功能发生改变，从而增加特定肿瘤发病风险[1]。张杨[2]等研究发现GST-π 在胃癌组织中的表达要明显高于正常胃黏膜组织，这说明GST-π的高表达可能与胃癌的发生、发展密切相关。怀建国[8]等认为MRP、GST-π的表达在浸润程度不同及淋巴结是否存在转移的胃癌组织间不具有统计学差异，这提示它们的表达与肿瘤浸润程度及淋巴结转移情况不具有相关性。我们通过本次实验得出GST-π蛋白在贲门癌中的表达与淋巴结的转移之间不具有相关性。Ye等[9-10]通过实验研究证实贲门癌 GST-π蛋白的阳性表达率要高于其他部位的胃癌，我们通过对196例包埋患者的实验中也同样得出GST-π蛋白在贲门癌中高表达。GST-π蛋白对胃贲门癌的耐药机制与其对贲门癌预后的影响需要进一步的研究证明。

通过本次实验结果显示，GST-π蛋白在贲门癌中的表达与其临床病理特征之间存在一定的相关性。GST-π蛋白在贲门癌中的表达与患者的年龄、性别以及淋巴结的是否转移无关，而在不同肿瘤Lauren分型中具有差异性。胃贲门癌组织的耐药产生是多因素参与的共同结果，GST-π的作用是否跟其他耐药相关蛋白有协同作用以及在肿瘤细胞产生耐药的过程中GST-π可能存在某种水平的共同调节机制目前都不明确。综上所述，GST-π蛋白在贲门癌中的表达或缺失可能参与其发生发展的过程，具体机制有待进一步研究。

【参考文献】

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