酶联免疫法测定合肥市售鱼虾链霉素残留量的探讨

材料与方法

1.1样品采集

课题小组于2018年10月至12月在合肥市蜀山、庐阳、瑶海、包河4个区共16个水产品市场、农贸市场和大型超市分别随机采购了鲫鱼和河虾。采样后在冰箱-20℃进行低温保存。

1.2试验仪器与试剂

1.2.1仪器匀浆机（T10，德国IKA公司）;离心机（H1650，湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）;酶标仪（SpectraMax M，美国MD公司）。

1.2.2试剂链霉素检测试剂盒（深圳芬德生物技术有限公司），其余化学试剂均为分析纯。

1.3试验方法

1.3.1样品处理分别配置PB缓冲液（1. 2 g NaH2PO4·2H2O和2. 175 g NaH2PO4·2H2O加入去离子水1 000 ml溶解，0.05 mol/L）、复溶液以及工作洗涤液。将配好的洗涤液稀释20倍。处理待测鱼虾样品，取肉，粉碎并制成匀浆。然后称取2 g去除脂肪的匀浆待测样品，加入8 ml PB缓冲液（0.05 mol/L），将其充分震荡混匀。在56℃的水浴环境下放置0.5 h后，接着在室温下上离心10 min，转速为4 000 r/min。用移液器取1 ml上清液加入离心管中，再加入1 ml正己烷，充分混匀，室温下4 000 r/min转速离心。用移液器取50 ml用于分析。

1.3.2酶联免疫法检测链霉素含量分别将标准品和样本取50 μl/孔加入到微孔中，分别向每个微孔中加入50 μl抗体工作液，混匀，在室温条件下避光反应30 min。将孔内的液体甩干，向每孔中加入350 μl工作洗涤液充分洗涤，共洗涤5次，最后用吸水纸拍干。向每个微孔中加入100 μl酶标记物，室温条件下避光反应30 min。重复洗涤操作。然后，向每孔中加入底物液A 50 μl，再加底物液B 50 μl，混匀，在室温条件下避光显色15 min。最后，在每孔中加入50 μl终止液，混匀，终止反应。终止反应10 min内，用酶标仪在450 nm和630 nm波长处测定每孔吸光度值。

1.3.3绘制标准曲线根据标准品数据（表1）绘制标准曲线（图1）。

1.4统计学分析

试验结果以x±s表示，采用SPSS 22.0软件中的t检验进行統计分析处理。P<0.05即有统计学意义。

2结果与分析

2.1样品检测结果

从表2来看，合肥市售鱼虾中链霉素的检出率为100%，残留范围为1.5～11.88 μg/kg，链霉素平均残留量为4.40 μg/kg，均在国家标准范围之内。

2.2数据分析对比

如图2a所示，在全部样本中，尽管河虾中链霉素残留浓度均值高于鲫鱼，但无显著性差异（P>0.05）。如图2b所示，鲫鱼中链霉素残留浓度均值按从大到小排列为：包河区>瑶海区>蜀山区>庐阳区，但是各区样本数据没有显著性差异（P>0.05）。如图2c所示，河虾中链霉素水平在各区变化趋势与鲫鱼相同。然而，经统计学分析发现，包河区河虾中链霉素残留量显著高于其他3个区（P<0.05）。

3讨论

3.1鱼虾中链霉素残留的原因

所有样品中链霉素的检出率为100%，但其残留量均在国家标准范围之内。引起鱼虾中链霉素残留的因素主要有鱼虾生病、鱼虾防腐、饲料添加等，因此建议水产养殖户加强生产和运输管理，合理用药，为消费者提供放心安全的水产品。

3.2可能影响试验结果的因素

3.2.1温度当室温低于25℃，或者试剂和待测样品的温度高于25℃的情况下，所测得的吸光度值会偏低。

3.2.2洗涤操作不当在洗板过程中如果过度洗涤，或者洗涤不充分，可能会导致所测得的数值偏大或者偏小。洗板拍干后应立即进行下一步操作，否则可能会出现板孔干燥的情况，使得标准曲线不成线性，重复性不好。

3.2.3孵育不完全在整个孵育过程中，都应该用盖板膜封住酶标板，避免反应。

3.3鱼虾中链霉素残留情况评价

此次调查中采集的样品均为可食用的鱼虾，是人们日常食用的水产品。链霉素在水产品防治感染性疾病方面发挥了重要作用，但其毒副作用大，尤其对听觉神经毒性较大，长期使用会使细菌产生耐药性，还会对人体肾脏和听觉神经造成不可逆转的损害。依据国家标准《动物源性食品中链霉素残留量测定方法酶联免疫法》（GB/T 21330-2007）的规定，水产品中链霉素的残留量检测下限为50.0 μg/kg，因此此次试验鱼虾中链霉素的残留量符合国家标准。

4结论

（1）样品鱼虾中链霉素的检出率为100%，残留范围为1.5～11.88 μg/kg，平均含量为4.40 μg/kg，所有鱼虾样品中链霉素的残留量均符合国家标准。

（2）虽然检测鱼虾样品中链霉素的残留结果均在国家标准范围内，但其检出率为100%，仍需要完善水产品药物残留监控体系，加强监管，并提高养殖人员的技术和素养，从源头上控制滥用抗生素的现象，保证食品安全。

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责任编辑：李杨