喉鳞癌中三磷酸腺苷酶家族蛋白2、抗磷酸化致癌基因和张力蛋白同源的磷酸酶基因的表达及意义

材料与方法

1.1 实验材料

收集2012年3月～2014年2月，宁波市鄞州第二医院经诊断并行喉鳞癌根治术的患者99例，选择术中留取的癌组织标本作为观察组，选择其中78例患者的距肿瘤边缘大于3 cm，并经病理证实为正常鳞状上皮的喉黏膜组织为对照组。所有标本均经病理主治医师再次阅片确认，并排除术前行放、化疗的患者。观察组中男58例，女41例，年龄40～81岁，平均（62.6±5.4）岁；对照组中男40例，女38例，年龄40～79岁，平均（60.5±5.2）岁。两组性别、年龄的一般资料比较，差异有统计学意义（P < 0.05），具有可比性。

1.2 方法

免疫组化检测ATAD2、C-MYC和PTEN蛋白的表达，应用免疫组织化学技术二步法，DAB染色，严格实验步骤。ATAD2、C-MYC和PTEN蛋白检测结果的判定方法：ATAD2阳性部位是细胞核，C-MYC和PTEN阳性部位是细胞质和/或细胞膜；选择10个400倍的高倍视野对上皮细胞进行观察，计算阳性细胞数与总细胞数的比值，取平均值，≥25%为阳性，<25%为阴性。

1.3 统计学方法

采用统计软件SAS 6.12对数据进行分析，正态分布计量资料以均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验；计数资料以率表示，采用χ2检验。相关性分析采用线性相关性分析法。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组中ATAD2、C-MYC和PTEN蛋白表达情况

ATAD2和C-MYC在观察组中的表达阳性率明显高于对照组，PTEN的表达阳性率明显低于对照组，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。见表1。

2.2 观察组中不同临床特征ATAD2、CMYC和PTEN表达情况

观察组中ATAD2、C-MYC和PTEN的表达与肿瘤最大径、淋巴结转移、脉管浸润和Ki67的表达有关。见表2。

2.3 观察组中ATAD2、C-MYC和PTEN表达的相关性分析

线性进行相关性分析显示：ATAD2与C-MYC呈正相关（r = 0.43，P = 0.0420），ATAD2与PTEN呈负相关（r = -0.46，P = 0.0371）。

3 讨论

喉鳞癌常见于中老年人，肿瘤常由异型增生的鳞状上皮发展而来，在此过程中，多种基因和蛋白的表达出现异常。ATAD2定位在染色体8q24，是ATP酶家族的重要成员[9-10]。目前研究显示ATAD2蛋白为含有220个氨基酸的蛋白，其结构中有典型的ATP结合位点，此位点也是ATAD2对下游蛋白合成与分解重要的调控点[11-12]。近来多项研究认为ATAD2高表达与肿瘤的进展有关[13-14]。C-MYC是癌基因，可以和DNA进行有效地结合，并调控转录因子。也有研究认为C-MYC是细胞周期的调控开关之一，即决定从G0/G1期进入S期[15]。也有观点认为C-MYC异常表达对细胞的正常生长发育及癌变起重要作用[16]。PTEN作为机体首先发现的磷酸酯酶活性的蛋白，可以引起细胞内第二信使磷脂酰肌醇（3，4，5）-三磷酸（PIP3）出现去磷酸化，抑制细胞的增殖过程[17]。也有研究显示肿瘤在进展中PTEN低表达时可以引起内皮细胞迁移能力增强及肿瘤血管的新生，进而加速肿瘤进展[18]。

免疫组化技术成熟，其标记的蛋白表达准确、客观。实验结果显示ATAD2和C-MYC的表达在观察组中升高（P < 0.05），PTEN的表达在观察组中下降（P < 0.05），提示ATAD2、C-MYC高表达、PTEN低表达促进肿瘤的发生。实验结果显示观察组中ATAD2、C-MYC和PTEN表达的阳性率与肿瘤体积、淋巴结转移、脉管浸润和Ki67的表达有关（P < 0.05），提示三者异常表达促进肿瘤的生长、淋巴结播散、脉管侵犯和细胞的增殖过程。由于以上因素均为临床判断肿瘤生物学行为、预后的重要指标，因此三者异常表达可能在一定程度上提示患者预后情况。本实验的相关性分析显示观察组中ATAD2和C-MYC的表达呈正相关（r=0.43，P < 0.05），ATAD2和PTEN的表达呈负相关（r=-0.46，P < 0.05），提示ATAD2可以调节C-MYC和PTEN的表达，三者具有一定的协同作用。有研究显示ATAD2与C-MYC可能与中介蛋白和活化物相关，即ATAD2与C-MYC对下游蛋白的调节作用可能更趋于一致，引起肿瘤的恶性转化和进展[19-20]。也有观点认为ATAD2是雌激素受体的共活化物，可以由前列腺素等诱导而激活，激活的ATAD2作用于雌激素受体的下游靶基因，如C-MYC和E2F等，进而引起细胞的增殖，加速肿瘤的生长和浸润[21]。但是关于ATAD2、C-MYC和PTEN协同作用的具体调节机制有待更多基础实验证实。

综上所述，喉鳞癌组织中ATAD2、C-MYC高表达、PTEN低表达，对肿瘤的发生和进展有促进作用，ATAD2与C-MYC、PTEN可能具有一定的协同作用。

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（收稿日期：2015-01-05 本文编辑：苏 畅）