云南山地仿野生抚育姜黄后姜黄素的含量变化研究

材料、仪器

11实验材料姜黄种苗、姜黄一年后子代、姜黄两年后子代：采自云南省西畴县把独村仿野生中药材种植基地。

12实验仪器戴安UltiMate3000高效液相色谱仪（美国戴安公司）；Gemini5uC1811oA46×250 mm色谱柱（美国phenomenex公司）；PhernomexC18保护柱（美国phenomenex公司）；BSA124S-CW电子天平（赛多利斯科学仪器北京有限公司）；ZF-I型三用紫外分析仪（上海顾村电光仪器厂）；CQ250超声清洗仪（上海超声波仪器厂）电热恒温水浴锅（北京市永光明医疗仪器厂）；202-1A（PCD-3000serials）烘箱（上海乔跃电子有限公司）

2实验方法

21水分检查

211姜黄（种苗）水分测定取姜黄供试品26452 g，放入干燥至恒重的扁形称瓶（286237 g），在105℃下干燥5h，取出，移至干燥器冷却30 min，精密称定重量（309815 g），再在105℃下干燥1h，冷却，称重（309796 g），至连续两次称重的差异不超过5 mg为止。根据减失重量，计算供试品中含水量（%）。

212姜黄（一年后子代）水分测定取姜黄供试品26525 g，放入干燥至恒重的扁形称瓶（283550 g），在105℃下干燥5h，取出，移至干燥器冷却30 min，精密称定重量（307576 g），再在105℃下干燥1 h，冷却，称重（307541 g），至连续两次称重的差异不超过5mg为止。根据减失重量，计算供试品中含水量（%）。

213姜黄（两年后子代）水分测定取姜黄供试品24456 g，放入干燥至恒重的扁形称瓶（282587 g），在105℃下干燥5h，取出，移至干燥器冷却30 min，精密称定重量（305190 g），再在105℃下干燥1 h，冷却，称重（305167 g），至连续两次称重的差异不超过5 mg为止。根据减失重量，计算供试品中含水量（%）。

22灰分检查取干燥至恒重（629666 g）坩埚，称取姜黄两年生子代药材40247 g，放到电炉上加热至无烟，转移至电炉500℃下加热5 h，移至干燥器，干燥30 min，称重。

23酸不溶性灰分的检查向上述装有灰分的坩埚中加入10 mL稀盐酸（95%-105%），水浴加热10 min，加热期间用5mL热水冲洗盖子，洗液并入坩埚中，10 min后用无灰滤纸过滤，水洗滤纸上的残渣至不显氯化物反应为止（用AgNO3试液测试不产生Agcl沉淀为止）。滤渣同滤纸移至坩埚，坩埚移至电炉干燥至恒重。

24浸出物检查取干燥至恒重（839315 g）平底烧瓶，加20318 g姜黄两年生子代药材，加50%稀乙醇50 mL，塞紧称重（1656 g），静置1 h，加热回流，微沸1h，放冷，取下烧瓶，称重（减失量用50%稀乙醇补足），过滤，取滤液25 mL至干燥恒重的蒸发（757330 g），蒸干，放入干燥器30 min，称重为759917 g。

25薄层鉴别取两年生子代姜黄粉末（过一号筛）02 g，加无水乙醇20 mL振摇，放置30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取姜黄素对照品，同法配置，作为对照品溶液。点样：吸取上述溶液各4 μL分别点于同一硅胶G薄层板上。展开剂：以三氯甲烷-甲醇-甲酸（96：4：07）为展开剂。检视条件：分别置于日光下及紫外灯（365 nm）下检视。

26含量测定色谱条件与系统适用性试验 以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈：2%冰醋酸溶液（48：52）为流动相；检测波长为430 mn。理论板数按姜黄素峰计算应不低于4000。

对照品溶液的制备 取姜黄素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每l mL含10 μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备 取不同姜黄细粉约02 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10 mL，称定重量，超声处理20 min，摇匀，离心，精密量取上清液1 mL，置10 mL容量瓶中，加入甲醇稀释至刻度线，摇匀，即得。

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注人液相色谱仪，测定，即得。

3实验结果

34小结

本实验通过对仿野生姜黄种苗、一年后子代、两年后子代进行相关研究（主要包括水分、灰分、水溶性浸出物、薄层鉴别、含量测定）。并采用HPLC法对姜黄野生种苗及其仿野生种植后不同子代药材中有效成分姜黄素进行含量比对分析。比对结果可见，姜黄素含量：两年后子代>姜黄种苗>一年后子代。

研究目的在于通过对引种后仿野生种植的不同年限的子代药材进行采挖，并对其进行有效成分的含量比对，以期得到含量最接近野生药材的第二代药材。该实验数据从中药资源学的角度考虑，为仿野生种植药材的有效性及可推广性提供实验依据。

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